Chuẩn bị tiêu chuẩn:
Chuẩn bị một tiêu chuẩn chứng khoán hỗn hợp bằng cách cân chính xác (± 0,01 mg) khoảng 10 mg mỗi tiêu chuẩn tham chiếu kavalactone vào bình định mức 10 ml. Thêm 7,0 mL metanol và sonicate cho đến khi hòa tan. Pha loãng đến thể tích bằng metanol và trộn.
Lưu ý: Cách khác, chuẩn bị một tiêu chuẩn chứng khoán kavain theo cách tương tự và sử dụng các yếu tố phản ứng kavalactone để định lượng chống lại.
Pha loãng tiêu chuẩn chứng khoán để tạo tối thiểu một đường cong tiêu chuẩn bốn điểm. Độ pha loãng tiêu chuẩn được đề xuất của chứng khoán là 1:10, 1:25 và 1: 100 sử dụng metanol.
Lưu ý: Bảo quản tiêu chuẩn ở nhiệt độ lạnh (0 - 5 ° C). Kavalactones xuống cấp nhanh chóng sau 48 giờ. Chuẩn bị các tiêu chuẩn tham khảo mới trước mỗi phân tích được khuyến khích.
Bộ máy
· Cân phân tích hiệu chuẩn chính xác đến ± 0,01 mg
· Bình, thể tích, loại A, kích cỡ các loại
· Lọ, sắc ký có nắp
· Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao như được mô tả trong chương USP. Xác minh và tài liệu rằng bộ máy, phần mềm và hệ thống con đáp ứng các yêu cầu về hiệu suất cho Trình độ cài đặt / Chứng chỉ hoạt động (IQ / OQ).
· Bộ lọc, 0,45 Từ, Gelman Acrodisc (P / N 4426), Whatman Puradisc ™ Polypropylen (Cat. Số 6788-2504), Kính Whatman GD / X (Cat. Số 6894-2504) hoặc Sonicator tương đương
· Cột, YMCbasic, 5 Pha, 4.6 x 250 mm (Cat. Số BA99S05-2546WT). Cột tương đương, YMC J'Sphere H80, 4 sóng, 4.6 x 250 (Cat. Số JH08S04-2546WT).
Thuốc thử
· Nước, lớp HPLC hoặc Nanopure
· Methanol, HPLC lớp
· Acetonitril, cấp HPLC
· Axit photphoric, thuốc thử ACS
Chuẩn bị mẫu:
Nguyên liệu thực vật
Cân chính xác (± 0,1mg) khoảng 750 mg thân cây nghiền mịn, lột hoặc nguyên liệu gốc.
Đặt vật liệu vào bình định mức 50 ml cùng với 40 ml metanol / nước (70/30). Sonicate trong 60 phút ở nhiệt độ phòng.
Để bình nguội đến nhiệt độ phòng và pha loãng đến thể tích bằng metanol / nước (70/30) và trộn.
Lọc và đặt mẫu vào lọ và nắp HPLC.
Chiết xuất bột và mềm (Paste)
Cân chính xác (± 0,1 mg) khoảng 100 mg dịch chiết vào bình định mức 50 ml. (Trọng lượng 100 mg dựa trên hàm lượng kavalactone 50-60% trong dịch chiết.) Lưu ý: Chiết xuất đồng nhất cẩn thận trước khi lấy mẫu. Điều này được thực hiện bằng cách đặt dịch chiết vào vật chứa được ngâm trong bể nước nóng 60 ° - 80 ° C cho đến khi chảy tự do.
Thêm 40 ml metanol và sonicate trong 10 phút hoặc cho đến khi tất cả các chất rắn đã hòa tan.
Để bình nguội đến nhiệt độ phòng và pha loãng đến thể tích bằng metanol và trộn.
Lọc và đặt mẫu vào lọ và nắp HPLC.
Mẫu bột
Chiết xuất Kava thường được pha trộn hoặc phun khô lên các chất mang khác nhau. Để thử nghiệm thành công các mẫu bột, cần phải phát triển một bước chuẩn bị mẫu để thu hồi kavalactones từ chất mang. Điều này có thể được thực hiện bằng cách chiết xuất đầu tiên bằng metanol hoặc nước tinh khiết.
Điều kiện sắc ký:
Cột: YMCbasic, 5 pha, 4,6 x 250 mm
Nhiệt độ cột: 40 ° C
Tốc độ dòng chảy: 0,6 mL / phút đối với YMCbasic; 1,0 ml / phút đối với J'Sphere
Pha động: axit photphoric 0,1%: rượu isopropyl: acetonitril (64:16:20 v / v)
Phát hiện: 220 nm (thay thế 246nm để cải thiện độ chọn lọc)
Thể tích tiêm: 5 Lít
Thời gian chạy: 30 phút
Thủ tục:
Chuẩn bị dung dịch chuẩn đối chiếu và chuẩn bị mẫu theo hướng dẫn.
Thực hiện một lần tiêm dung môi chiết.
Thực hiện tiêm đơn của các chế phẩm tiêu chuẩn.
Tạo một biểu đồ tuyến tính của các khu vực đỉnh tiêu chuẩn so với nồng độ tiêu chuẩn.
Thực hiện tiêm một lần chuẩn bị mẫu.
Tính nồng độ kavalactone trong mẫu.
Sự phù hợp của hệ thống:
Hệ số tương quan của hồi quy tuyến tính phải là .90,999. Độ phân giải giữa các đỉnh desmethoxyyangonin và yangonin phải là .81.8.
Shaanxi Y-Herb Biotech Co., Ltd.